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本發(fā)明公開了一種熒光差分超分辨成像方法及成像系統(tǒng)。通過調(diào)整系統(tǒng)中角反射器的位置延長或縮短一束高斯脈沖激光在第一光路中傳播的光程并轉(zhuǎn)換為環(huán)形脈沖激光后聚焦照射樣品，另一束高斯脈沖激光沿第二光路傳播聚焦照射樣品，照射樣品的環(huán)形脈沖激光與高斯脈沖激光之間的脈沖間隔大于熒光染料的熒光壽命，通過兩個探測器分別采集得到激發(fā)光脈沖信號及熒光信號。從熒光信號中分離出第一圖像及第二圖像，根據(jù)圖像處理規(guī)則對第一圖像及第二圖像進行分析處理后得到分辨率進一步提升的目標超分辨圖像。通過上述方法，采用低功率的脈沖激光減小了對生物樣品的破壞，解決了傳統(tǒng)熒光差分超分辨成像時因像素失配導致超分辨圖像質(zhì)量下降的問題。

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